Tipi RNA
mRNA
tRNA
rRNA
snRNA
piccoli RNA nucleari
splicing
snoRNA
piccoli RNA nucleolari
maturazione ribosoma
piccoli RNA
funzione
regolazione
esempi
miRNA
siRNA
piwiRNA
lncRNA
crisprRNA
Gene
definizione
unità funzione molecolare
cioè
unità funzionale
informazioni per produrre carattere
contenente
ORF (parte codificante)
parte non codificante regolatoria
unità strutturale
segmento DNA
costituito da sequenze leggermente diverse
alleli
struttura
deve
rimanere costante
contenere informazioni per RNA
evolvere con mutazioni
selezione
procarioti
organizzati
operoni
unità trascrizionali
raggruppamento geni
stessa via metabolica
unica regione regolatoria
contengono
start point
TSS+1
regione trascritta
a valle
regione di controllo
a monte
suddivisa
promotore
operatore
fattori proteici
enhancer
aumenta efficienza
terminatore
eucarioti
regione di controllo
situata
monte
valle
costituita
promotore
core promoter
fattori generali di trascrizione
promoter distale
fattori specifici di trascrizione
enhancers
fattori specifici di trascrizione
unico gene
RNA polimerasi
aspetti conservati
differenze
cellule eucariotiche
3 tipologie
cellule procariotiche
unica polimerasi
Struttura
core
2 subunità alpha (gene rpoA)
dimero
impalcatura core enzyme
dominio C-terminale
riconoscimento promotore
interagisce
fattori regolazione fase di inizio
1 subunità beta (gene rpoB)
forma
sito catalitico
canale entrata DNA
canale uscita RNA
canale ingresso nucleotidi
conservata e importante
1 subunità beta primo (gene rpoC)
1 subunità omega (gene rpoZ)
conservato
funzione non chiara
fattore sigma
funzione
riconoscimento promotore alta specificità
differenze
eucarioti
numerosi
procarioti
housekeeping (sigma70)
struttura
4 diverse regioni
helix-turn-helix
eccezione
1.1
3.2
regioni contatto DNA
regione 1.2
-10
+1
regione 2.1-2.4
pribnow box
subunità beta primo
TATA box (2.4)
regione 3.0
box -10
lembo subunità beta
regione 4.2
box -35
lembo subunità beta primo
identificazione promotori
DNA sequencing
metodo
sanger
provetta
DNA da copiare
primer multipla copia
nucleotidi
dNTP
ddNTP
polimerasi
buffer
funzionamento
1- reazioni di polimerizzazione
OH in C3 -> prosegue
OH less -> interrompe
2- interruzione casuale
3- elevato numero di frammenti
terminano con base azotata nota
DNA footprinting
1-DNAsi
scinde DNA in punti casuali
2- Polimerasi
ingrobro
DNasi non taglia il promotore
Allineamento sequenze
individuare sequenze conservate
-35
-10
consenso
base che ha la maggior probabilità di trovarsi in una determinata posizione
identificazione promotore
forza del promotore
efficienza
spacing
fra
transcription start site
sequenza consenso -10
fra
sequenza consenso -10
sequenza consenso -35