Inizio
1- legame fattore sigma
1- regione 1.1 amminoterminale
lega
regione 2
regione 4
impedisce legame
reversibile
2- formazione oloenzima
3- attacco al DNA
1- A e T
posizione
-11
-7
altamente conservati
2- legame fattore sigma
3- spostamento braccio amminoterminale
spostato nella subunità beta
blocca ingresso DNA
complesso binario chiuso
4- flip di A e T
5- incurvamento DNA con apertura
90° a livello pribnow box
complesso binario aperto
6- rimozione regione 1.1
2- trascrizione abortiva
cos'è
trascrizione primi 10 nucleotidi
promotore
ripetutamente
complesso ternario
RNA polimerasi
ibrido DNA/RNA
perché
fattore sigma -> elevata affinità promotore
quindi
1- regione 3.2 allontanata
2- distacco fattore sigma
3- cambiamento conformazionale
diverso numero di basi comperte
energia necessaria
DNA scrunching-melting
1- DNA superavvolto
2- svolgimento DNA
Allungamento
legami a idrogeno
1- RNA polimerasi
base 1 catena RNA crescente
base 2 (successiva) filamento templato
2- rottura legami a idrogeno
3- ingresso base successiva di RNA
4- RNA polimerasi
base 1 catena RNA crescente
base 2 (successiva) filamento templato
avanzando di una posizione
sito attivo
subunità beta e beta primo
F-loop
denaturazione DNA
Trigger loop
Bridge helix
interagisce ione magnesio
Zipper
rinatura DNA
stacca RNA
stabilizza ibrido RNA/DNA
Lid
Rudder
cooperano con F-loop
separazione RNA/DNA
canale ingresso DNA
canale uscita DNA
canale uscita RNA
fasi
1- F-loop denatura
2- Zipper
rinatura DNA
stabilizza ibrido RNA/DNA
3- Rudder e Lid
separato DNA/RNA
4- 2 ioni magnesio
nucleotide entrante
bridge helix (istidina)
5- protonazione trigger loop
cambiamento conformazionale
energia necessaria
1- rottura legame covalente
2- rilascio pirofosfato
3- formazione legame covalente fosfodiestereo
antibiotici
funzionamento
blocco trascrizione batterica
quali
rifamicine
legano vicino sito catalitico
fidaxomicine
clostridium difficile
lega
lisina subunità beta primo
pseudouridimicina
compete con UTP
blocco trascrizione
mixopyronina
lega lontano sito catalitico
correzione
1 errore ogni 10^4
due modi
istantaneo
rimozione nucleotide errato
aggiunto nucleotide corretto
successivamente
rimozione intera segmento
trascrizione corretta
topoisomerasi
funzioni
svolgere superavvolgimenti
nucleasi reversibili
legame fosfodiestereo
mantengono energia
processi
ricombinazione
riparazione
replicazione
tipologie
topoisomerasi I
1- tagliano singolo filamento
2- altro filamento passa nel taglio
3- risaldatura
no ATP
topoisomerasi II
1- taglio doppio filamento
2- passaggio tra 2 doppi filamenti
3- risaldatura
ATP
Terminazione
terminazione intrinseca
sequenza biripartita
ovvero
2 ripetizioni invertite
forma
struttura a forcina
formata
ansa
loop
causa
ingombro sterico RNA polimerasi
stringa di uracili
difficile da reperire
2 legami ad H deboli
terminazione rho-dipendente
fasi
1- rho lega RNA
2- scorrimento veloce
scioglie strutture secondarie
attività ATPasica
3- raggiunge RNA polimerasi
4- riconosce sequenze Rut
ricche di citosine
5- destabilizzazione ibrido RNA/DNA
6- distacco RNA polimerasi
siti rut
criptici
presenza ribosoma
tRNA
sequenze secondarie
impediscono legame rho
rRNA
antiterminatori
1- riconosciuti da proteine
2- impediscono legame rho